今天來聊聊關(guān)于大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備實驗報告，大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備的文章，現(xiàn)在就為大家來簡單介紹下大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備實驗報告，大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備，希望對各位小伙伴們有所幫助。

1、（1）質(zhì)粒DNA的質(zhì)量和濃度： 用于轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒DNA應(yīng)主要是超螺旋態(tài)的，轉(zhuǎn)化率與外源DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，但當加入的外源DNA的量過多或體積過大時，則會使轉(zhuǎn)化率下降。

【資料圖】

2、一般地，DNA溶液的體積不應(yīng)超過感受態(tài)細胞體積的5%，1ng的cccDNA即可使50ul的感受態(tài)細胞達到飽和。

3、對于以質(zhì)粒為載體的重組分子而言，分子量大的轉(zhuǎn)化效率低，實驗證明，大于30kb的重組質(zhì)粒將很難進行轉(zhuǎn)化。

4、此外，重組DNA分子的構(gòu)型與轉(zhuǎn)化效率也密切相關(guān)，環(huán)狀重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化率較分子量相同的線性重組質(zhì)粒高10~100倍，因此重組DNA大都構(gòu)成環(huán)狀雙螺旋分子。

5、 （2）感受態(tài)細胞的質(zhì)量： 所用的CaCl2等試劑均需是最高純度的，并用最純凈的水配制，最好分裝保存于4℃ （3）細胞的生長狀態(tài)和密度 最好從-70℃或-20℃甘油保存的菌種中直接轉(zhuǎn)接用于制備感受態(tài)細胞的菌液。

6、不要用已經(jīng)過多次轉(zhuǎn)接，及貯存在4℃的培養(yǎng)菌液。

7、細胞生長密度以每毫升培養(yǎng)液中的細胞數(shù)在5×107個左右為佳。

8、即應(yīng)用對數(shù)期或?qū)?shù)生長前期的細菌，可通過測定培養(yǎng)液的OD600控制。

9、對TG1菌株，OD600為0．5時，細胞密度在5×107個/ml左右。

10、（應(yīng)注意OD600值與細胞數(shù)之間的關(guān)系隨菌株的不同而不同）。

11、密度過高或不足均會使轉(zhuǎn)化率下降。

12、 （二）感受態(tài)細胞轉(zhuǎn)化中的影響： 整個操作過程均應(yīng)在無菌條件下進行，所用器皿，如離心管，移液槍頭等最好是新的，并經(jīng)高壓滅菌處理。

13、所有的試劑都要滅菌，且注意防止被其它試劑、DNA酶或雜DNA所污染，否則均會影響轉(zhuǎn)化效率或雜DNA的轉(zhuǎn)入。

14、整個操作均需在冰上進行，不能離開冰浴，否則細胞轉(zhuǎn)化率將會降低。

相信通過大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備這篇文章能幫到你，在和好朋友分享的時候，也歡迎感興趣小伙伴們一起來探討。

免責聲明：本文不構(gòu)成任何商業(yè)建議，投資有風險，選擇需謹慎！本站發(fā)布的圖文一切為分享交流，傳播正能量，此文不保證數(shù)據(jù)的準確性，內(nèi)容僅供參考

關(guān)鍵詞：